|
Vyučující
|
-
Fellner Martin, prof. RNDr. Ph.D.
-
Nožková Vladimíra, Mgr. Ph.D.
-
Husičková Alexandra, Mgr. Ph.D.
-
Plíhal Ondřej, RNDr. Ph.D.
-
Balarynová Jana, Mgr. Ph.D.
-
Karady Michal, Mgr. Ph.D.
|
|
Obsah předmětu
|
1) Základy fotomorfogeneze - fyziologické metody Studium fotomorfogeneze - vliv modrého a červeného světla na prodlužování hypokotylů a kořenů Arabidopsis thaliana a rajčete Solanum lycopersicum v podmínkách in vitro. Budou studovány základní fotomorfogenní reakce rostlin při přechodu ze skotomorfogeneze na světlo. Bude stanovena délka hypokotylu a kořene v závislosti na světelných podmínkách a bude vypočítán výsledný účinek kvality světla (inhibice, stimulace) na prodlužovací růst obou orgánů (kontinuální modré a červené světlo - výsev (bude nachystán, po 3 dnech transfer, po týdnů měření; zařazení studia fotomorfogenních mutantů s defekty ve fytochromech a kryptochromech). 2) Gazometrické metody Současné stanovení rychlosti asimilace CO2, transpirace, respirace, vodivosti průduchů na listu experimentální rostliny. Měření světelných křivek fotosyntézy na listu rostliny. Změření základních fluorescenčních parametrů na světlo a na tmu adaptovaného vzorku (FV/FM, FV´/FM´, PSII, qP, qN, NPQ) 3) Analýza fotosyntetického aparátu Analýza velmi rychlých změn při indukci fluorescence chlorofylu. Kinetika zhášení fluorescence chlorofylu. Měření obsahu chlorofylu analyticky i nedestruktivně pomocí chlorofylmetrů (SPAD vs. NDVI). 4) Měření obsahu vybraných rostlinných hormonů pomocí hmotnostní spektrometrie Extrakce rostlinného materiálu, přidáni značeného standardu, převedení vzorku do finální formy, měření na hmotnostním spektrometru. Příprava kalibrační křivky, vyhodnocení měření. 5) Základy fluorescenční a elektronové mikroskopie - metody kvantifikace genové exprese Subcelularní lokalizace GFP značených proteinů 6) Kvantitativní PCR Příprava desky a spuštění desky (účinnost primerů a exprese genu), vyhodnocení získaných dat Elektroforetické metody Příprava agarósového gelu, nanesení vzorku, vyhodnocení výsledku, příprava a spuštění nativního akrylamidového gelu, detekce aktivity polyfenoloxidasy
|
|
Studijní aktivity a metody výuky
|
Metody práce s textem (učebnicí, knihou), Pozorování, Demonstrace, Laborování
- Účast na výuce
- 24 hodin za semestr
|
|
Výstupy z učení
|
Cílem cvičení je seznámit studenty se základy některých experimentálních metod používaných ke studiu dějů v rostlinách na buněčné a molekulární úrovni.
Po absolvování cvičení by měl student být schopen: - provádět základní experimentální postupy ve studiu rostlinné fotomorfogeneze - používat gazometrické metody - používat základní metody studia fluorescence chlorofylu in vivo - používat základní metody k identifikaci jednoduchých chemických látek v biologických materiálech - použít of fluorescenční a elektronovou mikroskopii, provádět základní klonovací experimenty a použít experimentální metody pro kvantifikaci genové exprese - provádět kvantitativní PCR (qPCR) - provádět gelovou elektroforézu
|
|
Předpoklady
|
Účast na předmětu je podmíněna splněním předmětů KBB/MBIO1, KBC/BCH, LRR/FZRSB
|
|
Hodnoticí metody a kritéria
|
Systematické pozorování studenta
Stoprocentní docházka, zápočet
|
|
Doporučená literatura
|
-
Arndt C et al. (2012). Native Polyacrylamide Gels. In: Kurien B., Scofield R. (eds) Protein Electrophoresis. Methods in Molecular Biology (Methods and Protocols), vol 869. Humana Press, Totowa, NJ.
-
Bustin SA et al. (2009). The MIQE Guidelines: Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments.
-
Dunst S, Tomancak P. (2019). Imaging Flies by Fluorescence Microscopy: Principles, Technologies, and Applications. Genetics 211: 15?34.
-
Holčapek M. Univerzita Pardubice, http://holcapek.upce.cz/teaching/01_Uvod.pdf.
-
Jones R et al. (2013). The molecular life of plants; Wiley-Blackwell, American Society of Plant Biologists. USA.
-
Lazár D. (2015). Parameters of photosynthetic partitioning. J. Plant Physiol. 175, 131?147..
-
Procházka S., Macháčková I., Krekule J., Šebánek J. a kol. (1998). Fyziologie rostlin. Academia, Praha.
-
Šmarda J. (2008). Metody molekulární biologie. Brno: Masarykova univerzita, ISBN 978-80-210-3841-7.
-
Von Caemmerer S and Farquhar GD. (1981). Some relationships between the biochemistry of photosynthesis and the gas-exchange of leaves. Planta 153: 376-387.
|