|
Vyučující
|
-
Ševčík Juraj, prof. RNDr. Ph.D.
-
Petr Jan, doc. RNDr. Ph.D.
|
|
Obsah předmětu
|
Pohyb iontů v elektrickém poli. Pohyblivost iontů. Pohyblivost limitní, aktuální , efektivní. Získávání a měření iontových pohyblivostí. Souvislosti s molární a specifickou vodivostí. Typy elektromigračních metod. Elektroforetický a elektroosmotický pohyb. Elektrická dvojvrstva, elektrokinetický potenciál. Ovlivnění elektroforetické rychlosti a pohyblivosti. Využití disociačního stupně u slabých kyselin a zásad, tvorba komplexů. Amfolyty, isoelektrický bod, optimální pH pro separaci amfolytů. Ovlivnění elektroosmózy. Vliv pH, materiálu, úpravy povrchu. Zónová elektroforéza, charakteristiky techniky. Rozšiřování zón a potlačení difúze stabilizací zón. Stabilizace nosičem, gelem, stěnou, elektrickým polem. Zonová elektroforéza v gelech. Analytická a preparativní elektroforéza v plošném uspořádání. Kapilární zónová elektroforéza (CZE). Účinnost a rozlišení. Vliv disipovaného tepla, osmózy, adsorpce, elektromigrační disperze na účinnost. Vliv chemické úpravy kapiláry radiálního napětí, volby základního elektrolytu, pracovní napětí. Dávkování v kapilární elektroforéze. Detekce, optické, elektrochemické a hmotnostní detektory. Separace neutrálních molekul. Micelární kapilární elektroforéza. Speciální ovlivnění efektivních pohyblivostí. Inkluzní komplexy, crown komplexy, afinitní komplexy, separace optických isomerů. Příklady CZE ve volných roztocích a v gelech. Speciální úpravy s proměnným složením základního elektrolytu. Technika pohyblivého rozhraní, charakteristika techniky a její využití. Izoelektrická fokusace, charakteristika techniky. Fokusace v gradientu pH, gradientu ligandu. Samozaostřující a koncentrační efekt. Vytváření pH gradientu přirozené a syntetické amfolyty. Spojení IEF a CZE. Kapilární izotachoforéza, charakteristika techniky. Samozaostřující efekt, izotachoforetická podmínka. Kohlrauschova regulační funkce-podmínka kontinuity. Vedoucí a koncové elektrolyty. Předpověď a výpočet optimálních podmínek separace. Spojení ITP a CZE. Praktické příklady ITP analýzy. Kapilární izotachoforéza a zónová elektroforéza. Aplikace metod na malé molekuly a makromolekuly.
|
|
Studijní aktivity a metody výuky
|
Přednášení
- Účast na výuce
- 13 hodin za semestr
- Domácí příprava na výuku
- 13 hodin za semestr
- Příprava na zápočet
- 34 hodin za semestr
|
|
Výstupy z učení
|
Cílem je seznámit se principy a instrumentací v elektromigračních metodách.
Popsat základní principy migrace inotových druhů v elektrickém poli. Definovat vztahy mezi složením elektrolytu a migrací iontových druhů. Popsat základní intrumentaci pro elektroforetickou separaci založenou na čipové technologii, kapilární a gelové technologii.
|
|
Předpoklady
|
Znalost základů analytické chemie a instrumentálních metod.
|
|
Hodnoticí metody a kritéria
|
Ústní zkouška
úspěšné absolvování ústního kolokvia - diskuze na libovolné dvě otázky
|
|
Doporučená literatura
|
-
1. J. P. Landers, Handbook of capillary electrophoresis, CRC Press (1997)..
-
2. D. R. Baker, Capillary electrophoresis, Wiley and sons, (1995)..
-
3. F. Fore, L. Křivánková, P. Boček, Capillary zone electrophoresis, Wiley and sons, (1993)..
-
4. R. Westermeier, Electrophoresis in Practice, A Guide to Methods and Applications of DNA and Protein Separartions, Wiley and sons, (2005)..
-
5. R. Westermeier, Electrophoresis in Practice, A Guide to Methods and Applications of DNA and Protein Separartions, Wiley and sons, (2005)..
|