|
Vyučující
|
-
Zalabák David, Mgr. Ph.D.
|
|
Obsah předmětu
|
1. Úvodní seminář. Inokulace a kultivace expresních buněk E. coli nesoucí příslušný expresní vektor. Příprava potřebných médií pro heterologní expresi proteinů. 2. Nastavení vlastní heterologní exprese. Příprava potřebných chemikálií a pufrů. 3. Sklizení bakteriální kultury, příprava bakteriálního lyzátu a čištění rekombinantního proteinu pomocí afinitní chromatografie. 4. Dialýza vzorku a zakoncentrování vzorků pomocí ultrafiltrace. 5. Analýza proteinu pomocí SDS-PAGE pro ověření čistoty a molekulové hmotnosti. Stanovení koncentrace proteinů.
|
|
Studijní aktivity a metody výuky
|
Dialogická (diskuze, rozhovor, brainstorming), Demonstrace, Laborování
- Účast na výuce
- 39 hodin za semestr
- Domácí příprava na výuku
- 15 hodin za semestr
|
|
Výstupy z učení
|
Cílem předmětu je seznámení studentů s problematikou přípravy a purifikace rekombinantních proteinů. V rámci tohoto blokového cvičení se student naučí provést heterologní expresi proteinů, jejich následnou purifikaci a základní biochemickou analýzu.
Student využije znalostí, metod a technik získaných během předchozího studia. Jednotlivé experimenty na sebe navazují, student se naučí plánovat si časový průběh jednotlivých experimentů.
|
|
Předpoklady
|
Pro studenty 1. a 2. ročníku navazujícího studijního programu Biochemie.
|
|
Hodnoticí metody a kritéria
|
Analýza výkonů studenta, Systematické pozorování studenta
Splnění všech experimentálních úloh a vypracování protokolu z řešeného experimentu.
|
|
Doporučená literatura
|
-
A guide to Polyacrylamide Gel Electrophoresis and Detection (BioRad) http://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lsr/literature/Bulletin_6040.pdf.
-
PROTEIN EXPRESSION & ANALYSIS IMPACT Kit Instruction Manual (New England Biolab) https://www.neb.com/-/media/catalog/datacards-or-manuals/manuale6901.pdf.
-
Kakoli Bose. (2022). Textbook on Cloning, Expression and Purification of Recombinant Proteins.. Springer Singapore.
-
Zalabák D., Galuszka P., Mrízová K., Podlešáková K., Gu R., Frébortová J. (2014). Biochemical characterization of the maize cytokinin dehydrogenase family and cytokinin profiling in developing maize plantlets in relation to the expression of cytokinin dehydrogenase genes. Plant Phys. Biochem. 74, 283-293.
|