|
Vyučující
|
-
Kopečný David, Mgr.
-
Zalabák David, Mgr. Ph.D.
|
|
Obsah předmětu
|
1. Inokulace a kultivace buněk E. coli, nesoucích příslušné plazmidy. Izolace plazmidové DNA z bakteriálních buněk. Restrikční štěpení plazmidové DNA. Agarózová elektroforéza. Určení koncentrace DNA. 2. Detekce rekombinantní DNA v potravinách pomocí PCR. Izolace DNA z mouky. Nastavení a vyhodnocení PCR reakce. 3. Transformace kvasinek S. cerevisiae "shuttle" vektorem a integračním vektorem nesoucím gen Atckx2. Selekce transformantů a porovnání účinnosti obou transformací. Kontrola pomocí měření aktivity CKX. 4. Práce s bakteriofágovou cDNA knihovnou. Kultivace bakteriofága, izolace DNA. Stanovení titru knihovny. Detekce málo abundantního a provozního genu. 5. Izolace RNA z rostlinného materiálu, přepis do cDNA a následná RT PCR reakce.
|
|
Studijní aktivity a metody výuky
|
Dialogická (diskuze, rozhovor, brainstorming), Demonstrace, Laborování
- Příprava na zápočet
- 30 hodin za semestr
- Domácí příprava na výuku
- 70 hodin za semestr
- Účast na výuce
- 100 hodin za semestr
|
|
Výstupy z učení
|
Seznámení se se standardními metodami molekulární biologie.
Aplikovat metody a postupy užívané v molekulární a buněčné biologii
|
|
Předpoklady
|
Absolvování předmětu KBC/MBIOG
|
|
Hodnoticí metody a kritéria
|
Analýza výkonů studenta, Systematické pozorování studenta
Student musí splnit všechny experimentální úlohy, dosáhnout 80 % možných bodů (hodnotí se kvalita a přesnost práce podle výsledků) a vypracovat protokoly o řešení úloh. Před nástupem do cvičení je nutné složit zkoušku KBC/MBIOG.
|
|
Doporučená literatura
|
-
Alberts B, Johnson A, Lewis J, Morgan D, Raff M, Roberts K, Walter P. (2017). Molecular Biology of the Cell, 6th edition. Garland Science.
-
Green M.R., Sambrook J. (2012). Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press.
-
Šmehilová M, Dzurová L, Frébort I, Galuszka P. (2014). Laboratorní cvičení z molekulární biologie. elektroniká verze.
|