1. Obecný úvod: struktura nukleových kyselin, jejich význam a funkce, replikace, transkripce, translace. Historie DNA diagnostiky. 2. Amplifikace a princip polymerázové řetězové reakce (PCR), jednotlivé kroky PCR, termocyklér. Podmínky PCR: tzv. master mixy, templátová DNA, primery, pufry, dNTP, typy a druhy polymeras. Metody množení DNA in vitro. 3. Klonování DNA v praxi, tvorba a význam DNA knihoven, metody sekvenování DNA - klasické a současné, blotování, databáze NK, orientace a vyhledávání v databázích NK. 4. Detekce amplifikované DNA v end-point PCR, agarózové gely, polyakrylamidové gely, elektroforéza, blotování,imunochromatografie. 5. ELISA metody a jejich význam v diagnostice. 6. Analýza NK pomocí restrikční analýzy, uplatnění v diagnostice. Diagnostické metody odvozené od PCR, PCR in situ. 7. Detekce amplifikované DNA v reálném čase (Real-time PCR), princip kvantifikace, základní chemismus (Sybrgreen, TaqMan, apod.), molecular beacons, detekce bodových polymorfismů. 8. Diagnostika NK v lékařství: mikrobiologie, virologie, parazitologie: praktické využití diagnostiky NK v přímé detekci mikroorganizmů. Detekce MTB, borélií, chlamydií, HIV, virových hepatitid, herpetických virů atd. 9. Diagnostika NK v zemědělství a lesnictví. 10. DNA diagnostika v potravinářství: diagnostika geneticky modifikovaných organizmů v potravinách a krmivech, druhová specifikace masných výrobků, sýrů, evropská legislativa týkající se GMO. 11. Diagnostika NK ve veterinářství. 12. Zavádění diagnostických metod, kontrola kvality používaných metod (QC), zajištění kvality používaných metod (QA), validace, certifikace, legislativa. 13. Molekulárně biologické diagnostické metody ve forenzní genetice.
|
-
Alberts B, Johnson A, Lewis J, Morgan D, Raff M, Roberts K, Walter P. (2017). Molecular Biology of the Cell, 6th edition. Garland Science.
-
Drábek, J. a kol. (2012). Detekce nádorových biomarkerů v molekulárně-biologické laboratoři. Olomouc: Univerzita Palackého v Olomouci.
-
Drábek, J. a kol. (2022). Vybrané metody forenzní genetiky. Nakladatelství UP Olomouc.
-
Hajdúch, M. (ed.) Drábek, J. (2022). Laboratory Techniques in Cellular and Molecular Medicine. Nakladatelství UP Olomouc.
-
Slabý, O., et al. (2015). Molekulární medicína. Praha Galén.
-
Šmarda, J., Doškař, J., Pantůček, R., Růžičková, V., & Koptíková, J. (2005). Metody molekulární biologie. Brno: Masarykova univerzita.
-
Vacek, J., Ostatná, V. (2021). Bioelektrochemie. Nakladatelství UP Olomouc.
|