|
Vyučující
|
-
Šafář Jan, RNDr. Ph.D.
-
Šimková Hana, Ing. CSc.
-
Hřibová Eva, Mgr. Ph.D.
-
Šafářová Dana, Mgr. Ph.D.
|
|
Obsah předmětu
|
Bezpečnost a zásady práce v laboratoři molekulární biologie.Příprava plazmidové DNA: inokulace a kultivace buněk E. coli, izolace plazmidové DNA, restrikční štěpení plazmidové DNA, agarózová elektroforéza, stanovení koncentrace DNA. Příprava transformantů: izolace fragmentů DNA z gelu a jejich přečištění, ligace DNA do připraveného plazmidu. Transformace kompetentních buněk E. coli a jejich kultivace. Selekce transformantů. Kontrola přítomnosti rekombinantních molekul v tranformantech (minipreparace plazmidu, restrikční analýza, elektroforéza). Fyzická lokalizace markerů na chromozomech za použití tříděných chromozomů a PCR.příprava vysokomolekulární DNA pro konstrukci knihoven dlouhých inzertů. Pulzní elektroforéza. Manipulace s DNA klony pomocí robota. Příprava hybridizačních membrán s bakteriálními klony o vysoké hustotě (práce s robotem). Prohledávání genomické knihovny DNA pomocí DNA: DNA hybridizace, identifikace pozitivních klonů. Prohledávání knihovny DNA pomocí PCR. Kvantitativní PCR.
|
|
Studijní aktivity a metody výuky
|
|
Dialogická (diskuze, rozhovor, brainstorming), Pozorování, Demonstrace, Laborování
|
|
Výstupy z učení
|
Klonování DNA, příprava a analýza BAC-ové knihovny. Kvantitativní PCR.
Po absolvování kurzu je student schopen: - Připravit plazmidovou DNA. - Připravit transformanty. - Pracovat s DNA knihovnami a DNA klony. - Prohledávat genomické knihovny DNA pomocí DNA.
|
|
Předpoklady
|
nespecifikováno
|
|
Hodnoticí metody a kritéria
|
Analýza výkonů studenta
Účast na cvičeních a vypracování protokolů.
|
|
Doporučená literatura
|
-
Brdička, R. Lidský genom na rozhraní tisíciletí. Grada Publishing, Praha, 2001.
-
Cantor, C.R., Smith, C.L. Genomics: The Science and Technology Behind the Human Genome Project, John Wiley and Sons, New York, 1999..
-
Cullis, C.A. Plant Genomics and Proteomics. John Wiley and Sons, Inc., New York, 2004.
-
Primrose, S.B. Principles of Genome Analysis: A guide to mapping and sequencing DNA from different organisms. Blackwell Science Inc., 1998..
|